Ko te Dithiothreitol (DTT) he kaihoko whakaheke, e mohiotia ana ano ko te taapiri matomato hou.He puhui pararopi iti me nga roopu mercaptan e rua (-SH).Na te whakaheke me te pumau, ka whakamahia nuitia te DTT i roto i nga whakamatautau koiora me te koiora ngota.
Ko te mahi nui a DTT he whakaheke i nga here disulfide i roto i nga pūmua me etahi atu koiora.Ko te here disulfide he waahanga nui o te whakakopa me te pumau o te pūmua, engari i raro i etahi ahuatanga whakamatautau, penei i te tātaritanga SDS-PAGE whakaheke, te whakakotahitanga pūmua me te whakakopa, he mea tika ki te whakaheke i te herenga disulfide ki nga roopu thiol e rua hei wetewete i te hanganga mokowā o te pūmua.Ka taea e DTT te tauhohe me nga here disulfide ki te whakaheke i a raatau ki nga roopu mercaptan, na reira ka whakatuwhera i te hanganga mokowā o te pūmua me te ngawari ki te tātari me te raweke.
Ka taea hoki te whakamahi DTT ki te tiaki i te ngohe me te pumau.I roto i etahi tauhohenga kua whakahiatohia e te enzyme, ka whakahekehia te mahi o te enzyme e te waikura.Ka taea e te DTT te tauhohe me nga mea hāora ki te whakaheke i a raatau ki nga matū kino kore, na reira ka tiaki i te mahi me te pumau o te enzyme.
Ka whakatauritea ki nga kaihoko whakaheke tuku iho penei i te β-mercaptoethanol (β-ME), ka kiia ko DTT he kaihoko whakaheke haumaru me te pumau.Ehara i te mea e mau ana i roto i te wairewa wai, engari ka mau tonu i ona ahuatanga whakaheke i raro i te pāmahana teitei me nga tikanga waikawa-waikawa.
He ngawari noa te whakamahi DTT.I te nuinga o te waa, ka rewa te DTT ki roto i te parapara e tika ana, ka taapiri atu ki te punaha whakamatautau.Ko te kukū tino pai o te DTT me whakatau kia rite ki te whakamatautau motuhake, me te nuinga o te waa e whakamahia ana i roto i te awhe o te 0.1-1mM.Ko te iti o te kukū ka taea te whakaiti i nga paanga kino ki te tipu o nga pūtau, ka taea hoki te whakaiti i te cytotoxicity na te nui o te whakaputanga o nga pūmua i whaaia.Ko te kaha ake o te kukume ka nui ake te taumahatanga o te tinana o te pūtau, ka pa ki te tipu o te pūtau me te pai o te whakapuaki.
Ko te huarahi ki te whakatau i te kukū tino pai ko te arotake i te taumata whakapuaki o te pūmua whainga ma te whakahaere i nga whakamatautau whakaurunga IPTG i nga kuhanga rereke.Ka taea te whakahaere i nga whakamatautau ahurea iti-iti ma te whakamahi i te whānuitanga o nga kukū IPTG (hei tauira, 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, me etahi atu) ka taea te arotake i te paanga o te whakahuatanga i nga kuhanga rereke ma te kimi i te taumata whakapuaki o te pūmua i whäia (hei tauira ki te Hauauru. te mokowhiti, te rewharewha ranei).E ai ki nga hua whakamatautau, ko te kukū me te awe korero pai i tohua hei kukū tino pai.
I tua atu, ka taea hoki e koe te korero ki nga tuhinga e tika ana, ki nga wheako ranei o etahi atu taiwhanga kia mohio ai koe ki te awhe kukū IPTG e whakamahia ana i raro i nga ahuatanga whakamatautau, katahi ka arotau me te whakatika kia rite ki nga hiahia whakamatautau.
He mea nui kia mohio koe ka rereke pea te kukū tino pai i runga i nga punaha korero rereke, nga pūmua whainga, me nga tikanga whakamatautau, no reira he pai ake te arotau i runga i ia keehi.
Hei whakarāpopototanga, ko te DTT he kaihoko whakaheke e whakamahia ana hei whakaiti i nga here disulfide i roto i nga pūmua me etahi atu rauropi koiora me te tiaki i te mahi o te enzyme me te pumau.Kua whakamahia whānuitia i roto i te matū-koiora me ngā whakamātautau koiora rāpoi.
Te wa tuku: Sep-28-2023